链霉菌(放线菌)超声破碎条件是什么?

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日期:2019-09-29 16:22
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解析:放线菌属于原核生物系统进化树上的(G+C)摩尔百分含量(mol%) 高的革兰氏阳性菌(Eubacteria) 分枝类群,它虽然具有原核生物特有的分子生物学特性,但在其不同类群中,
 
      细胞壁的化学组分变化很大。在做大肠杆菌超声时,采用的是4oow,破碎5s停5s的方法,效果不错,但是用在链霉菌上,由于细胞壁组成差异一般没什么效果。链霉菌(放线菌) 超
 
      声破碎前处理-般是配置成一定浓度的菌悬液。
 
      使用超声波细胞破碎仪破碎时采用的具体条件是:取*的24 h培养液于5 000r/min下离心5min收集菌体;用pH 7. 5的Na2HP0 -NaH2P0缓冲液洗涤3次,再用该缓冲液将菌体配成1: 3的菌悬液。
 
      置于40 mL大塑料试管内;将大塑料试管置于冰浴中,采用超声波细胞破碎仪破碎(功率2o0w, 1/ 2”探头,破碎30s, 间歇30s);破碎液于12000 r/min 下高速冷冻离心30 min, 收集细胞碎
 
      片和上清夜。洗涤菌体也可以用预冷的生理盐水或pH8的Tris- HC1,洗涤一次就可以。另外,超声剂量随样品量、菌体改变比较大,功率可以到400-600w, 破碎5s, 停5s, 冰浴,要加终浓度
 
      1mm[的PMSF.为确定合适的超声强度和次数,有必要随时镜检观察菌体是否完全破碎。